P3實驗室操作規(guī)范及流程

　　BSL-3應(yīng)用于臨床、診斷、教學(xué)、研究、或者生產(chǎn)設(shè)施，在該級別中開展有關(guān)內(nèi)源性和外源性病源的工作，若因暴露而吸入該病源。會引發(fā)嚴重的、可能致死的疾病。實驗人員應(yīng)在處理致病性的和可能使人致死的病源方面受過專業(yè)訓(xùn)練，并由對該病源工作有經(jīng)驗的、有資格的科學(xué)工作者監(jiān)督。

　　所有與傳染源操作有關(guān)的步驟，都在生物安全柜或其他物理遏制裝置中進行，或由穿戴合適防護服及設(shè)施的實驗人員進行。實驗室經(jīng)過特殊設(shè)計和施工。然而，應(yīng)該認識到現(xiàn)有有些設(shè)施，不一定滿足BSL-3的所有要求(即，雙門進入工作區(qū)和密封問題)。在這種情況下，在BSL-2設(shè)施中開展常規(guī)操作(如，診斷程序中用于鑒定;分型、敏感性測試的病源繁殖)，其安全級別也可接受，但還需做到:

　　1)將實驗室內(nèi)廢氣排出室外;

　　2)實驗室的通風經(jīng)過平衡以向室內(nèi)提供定向氣流 ;

　　3)工作時，禁止進入實驗室;

　　4)嚴格遵照或使用BSL-3中推薦的標準微生物操作、特殊操作和安全設(shè)備。只有實驗室主任可作出對BSL-3推薦的修訂方法進行補充的決定。

　　以下的標準和特殊安全操作、設(shè)備及設(shè)施和BSL-3病源有關(guān):

　　一般操作

　　1、 實驗時，由實驗室主任決定限制或禁止進入實驗室。

　　2、接觸傳染源的人員在離開實驗室取下手套后，要洗手。

　　3、實驗室內(nèi)嚴禁飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。實驗室內(nèi)戴隱型眼鏡的人，也要戴眼鏡和面罩。食品要存放在工作區(qū)外專用的櫥柜和冰箱中。

　　4、不能用嘴移液，只能用機械裝置移液。

　　5、制定銳器安全使用規(guī)范。

　　6、所有的操作過程應(yīng)盡量細心，避免產(chǎn)生氣溶膠。

　　7、至少每天一次、或有活體灑出時，對工作臺面進行消毒。

　　8、所有的培養(yǎng)物、儲存物及其它規(guī)定的廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行的消毒方法進行消毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近實驗室消毒的物料應(yīng)置于耐用、防漏容 器內(nèi)，密封運出實驗室。來自BSL-3實驗室的傳染性廢物轉(zhuǎn)移至他處釋放前應(yīng)消毒。

　　特殊操作

　　1、實驗時，關(guān)閉實驗室的門。

　　2、實驗室主任對進入實驗室進行控制，限制項目有關(guān)人員及輔助人員進入。一般情況下，易感人員或感染后會出現(xiàn)嚴重后果的人員，不允許進入實驗室或動物房，例如，患有免疫缺陷或免疫抑制的人，其被感染的危險性增加。實驗室主任對每種情況的估計和決定誰能進入實驗室或動物房工作，負有最終責任。未成年人不得進入實驗室。

　　3、實驗室主任應(yīng)制定規(guī)章和程序，只有告知潛在風險并符合進入實驗室特殊要求(如，經(jīng)過免疫接種)、遵守進出程序的人，才能進入實驗室和動物房。

　　4、當實驗室或遏制設(shè)施中有傳染源和感染動物時，所有實驗室和動物房入口處，應(yīng)貼有危險警告標志和常用的生物危險符號，并顯示以下信息：有關(guān)病源、 實驗室主任和有關(guān)責任人的姓名和電話表、進入實驗室的特別要求(如，必須免疫、戴口罩、或采取其他的個人防護措施)。

　　5、實驗室人員接受適當?shù)?、和實驗室中處理或?qū)⒁幚淼牟≡从嘘P(guān)的免疫接種或測試(如，乙肝免疫接種或TB皮試)，并建議根據(jù)所處理的病源定期進行皮試 。

　　6、適當時，收集和儲存適合于所有實驗室人員和其他有風險人員使用的基本血清樣品。根據(jù)所處理病源或?qū)嶒炇业墓δ埽瑧?yīng)定期收集其他血清樣品。

　　7、實驗室主任應(yīng)制定實驗室專用生物安全手冊，標準操作程序中要包括生物安全預(yù)防措施。要告知實驗人員特殊風險，實驗人員要閱讀，并在操作和程序中遵照執(zhí)行。

　　8、實驗人員及其輔助人員應(yīng)接受適當?shù)呐嘤?xùn)，包括和工作有關(guān)的可能存在的風險、防止暴露的必要措施和暴露評估程序。當程序必需改變時，有關(guān)人員必須每年更新知識，接受附加培訓(xùn)。

　　9、實驗室主任有責任確保在涉及BSL-3的微生物工作開展之前，所有人員熟練掌握標準微生物操作及技能，熟練掌握特殊實驗室設(shè)施的操作和運行，其中可能包括人致病菌或細胞培養(yǎng)物處理的重要技術(shù)，或由實驗室主任或其他熟悉于微生物安全操作及技能的、稱職的科研工作者提供的特殊培訓(xùn)課程。

　　10、必須經(jīng)常對所有污染的銳器采取高度預(yù)防措施，包括針頭和注射器、玻片、移液管、毛細管和手術(shù)刀。

　　a.針和注射器或其他銳器應(yīng)限制在實驗室內(nèi)，類似灌腸、靜脈切開放血、或?qū)嶒瀯游镆后w吸出等，可以用其他器具的，就不要用銳器?？赡軙r，用塑料器具代替玻璃器具。

　　b.注射和吸取感染材料時，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器(即注射器和針頭是一體的)。用過的一次性針頭必須彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭 套、從一次性注射器上去掉，或在丟棄 前進行人工處理，要不將之小心放入不會被刺穿的、用于收集廢棄銳器的容器中。非一次性銳器必須放置在堅壁容器中，轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒，最好高壓殺菌。

　　c.適當時，使用帶針頭套的注射器、無針頭的系統(tǒng)和其他安全設(shè)施。

　　d.打碎的玻璃器皿不能直接用手處理，必須用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或鑷子。盛污染的針頭、銳器、碎玻璃的容器在到掉前，應(yīng)按照地方、 州、聯(lián)邦的規(guī)定進行消毒。

　　11、所有與傳染源有關(guān)的開放操作，都應(yīng)在遏制設(shè)施內(nèi)的生物安全柜或其他物理遏制設(shè)備中進行。不許在開放的實驗臺上、并在開放 的設(shè)施中開展工作。用 背面為塑料質(zhì)地的紙擦拭生物安全柜內(nèi)的無孔臺面，便于清潔。

　　12、按日常程序、在有關(guān)傳染源的工作結(jié)束后、尤其是傳染源灑出或濺出后、或受到其他傳染源污染后，實驗室設(shè)備和工作臺面應(yīng)當使用有效的消毒劑消毒 。

　　a.灑出的傳染源需由專業(yè)人員、或由經(jīng)過適當培訓(xùn)且配有裝備的處理高濃度傳染源的人員進行消毒、處理、清洗。制定并公布可能造成濺灑的實驗程序。

　　b.污染的設(shè)備，在離開設(shè)施送去修理、維護或打包運輸前，要按照地方、州或聯(lián)邦的規(guī)定消毒。

　　13、培養(yǎng)物、組織，體液標本，或具有潛在傳染性的廢物要放入容器中，以防在收集、處理、儲存、運輸或裝卸過程中泄露。

　　14、實驗室里所有可能被污染的廢棄物品(如：手套、實驗室外套等)，在丟棄或重新使用之前，必須經(jīng)過消毒。

　　15、灑漏或偶然事件中，明顯或可能暴露于傳染源時，要立即向?qū)嶒炇抑魅螆蟾?。進行適當?shù)尼t(yī)學(xué)評估、觀察、治療，保留書面記錄。

　　安全設(shè)備

　　l、進入實驗室時，要穿上實驗防護服，如，前襟一體或后系式大褂、干凈的外套或連褲服。不得在實驗室外穿防護服。重復(fù)使用的衣服在清洗前要消毒，衣服被明顯污染后應(yīng)更換。

　　2、在處理傳染源、感染動物及被污染的儀器時，必須戴手套。

　　3、建議經(jīng)常更換手套和洗手，一次性手套不能重復(fù)使用。

　　4、有關(guān)傳染源的所有操作、感染動物的驗尸、從感染動物或胚胎卵采集組織或液體等，都應(yīng)在II級或III級生物安全柜中進行。

　　5、當操作不能在生物安全柜中進行時，應(yīng)適當?shù)木C合使用個人防護設(shè)施(如，口罩，面罩等)和物理遏制設(shè)施(如：帶安全罩或密封轉(zhuǎn)頭的離心機)。

　　6、當進入內(nèi)有感染動物的房間時，應(yīng)采取呼吸和面部保護措施。

　　實驗室裝置

　　1、實驗室要離開建筑物內(nèi)的行走區(qū)，禁止隨便進入實驗室。進入走道后，至少需要經(jīng)過兩道自動門，才能進入實驗室。所有的門都應(yīng)有鎖(見附錄F)(另發(fā))。 過道里可以設(shè)計一個更衣室。

　　2、每個實驗室有一個洗手池，洗手池的操作應(yīng)該是免接觸式或全自動的，洗手池應(yīng)安裝在門口附近。

　　3、處理BSL-3病源的區(qū)域，墻面、地面、天花板應(yīng)易于清洗、消毒;若有接縫，應(yīng)密封;表面應(yīng)光滑防水;對實驗室常用化學(xué)試劑和消毒劑具有耐腐蝕性。地板應(yīng)整體、防滑，建議在地板凹處使用掩蔽罩。墻面、地面、天花板都不應(yīng)留有縫隙，或在設(shè)施消毒時能夠密封。

　　4、實驗臺表面應(yīng)能防水、耐熱、耐有機溶劑、耐酸堿和用于工作臺面及設(shè)施消毒的其他化學(xué)物質(zhì)。

　　5、實驗室的操作臺應(yīng)能承受預(yù)期的重量。實驗臺、安全柜以及設(shè)備間的空間便于打掃。實驗室使用的椅子及其它器具，應(yīng)覆蓋易于清洗的非織物。

　　6、所有的窗門必須關(guān)閉和密封。

　　7、有實驗垃圾處理設(shè)施及其使用方法，該設(shè)施最好設(shè)在實驗室內(nèi)(即，高壓鍋、化學(xué)消毒劑、焚燒爐、其他可行的消毒方法)。應(yīng)有消毒設(shè)備使用方法。若垃圾運出實驗室，應(yīng)適當密封，并不應(yīng)通過公共通道運送。

　　8、應(yīng)配置生物安全柜，安全柜放置地點應(yīng)遠離門、房間通風百葉窗、實驗室內(nèi)行走區(qū)。

　　9、應(yīng)有管道化的排氣系統(tǒng)，該系統(tǒng)進入實驗室的風向應(yīng)從"潔凈區(qū)"到"污染區(qū)"。排出的空氣不再循環(huán)至建筑物內(nèi)的任何其他區(qū)域。排出的空氣不需要過濾或 作其他處理，但也要依所處場所的要求、特殊病源操作、使用條件而定。外部排氣口要遠離有人區(qū)、進風口，否則需經(jīng)過HEPA過濾。實驗人員必須證實進入實 驗室的風向是正確的。建議在實驗室的入口處設(shè)置可視的監(jiān)視裝置，表明和證實進風的風向。要考慮安裝HVAC控制系統(tǒng)。防止實驗室持續(xù)正向增壓。應(yīng)安裝 聲音報警裝置，警告實驗人員HVAC系統(tǒng)出了問題。

　　10、若生物安全柜至少每年經(jīng)過測試和確證，則二級生物安全柜排出的、經(jīng)過HEPA過濾的空氣，可進入實驗室循環(huán)。當二級生物安全柜通過建筑物排氣系 統(tǒng)排出空氣時，安全柜的排氣管路的連結(jié)，應(yīng)避免對安全柜的空氣平衡或建筑物排氣系統(tǒng)的空氣平衡產(chǎn)生干擾(如，在安全柜排氣管和排氣管道間形成空氣隙) 。當使用三級生物安全柜時，要和排氣系統(tǒng)直接連結(jié)。若三級安全柜和供氣系統(tǒng)相連，應(yīng)避免安全柜正向增壓(見附A)。

　　11、會產(chǎn)生氣溶膠的連續(xù)流離心機及其他設(shè)備應(yīng)在一個裝置中，該裝置通過HEPA過濾器排出空氣，而避免直接排入實驗室中。至少每年測試HEPA系統(tǒng)。另外，當遠離有人區(qū)或進風口時，該設(shè)備排出的空氣可以排到外面。

　　12、真空管路由液體消毒劑汽水閥和HEPA過濾器及類似設(shè)備保護。需要時，要更換過濾器。另外，可以使用手提真空泵(也需要由汽水閥和過濾器正確保護) 。

　　13、實驗室內(nèi)應(yīng)有眼睛沖洗裝置。

　　14、光線適宜于開展所有的工作，避免反光和閃光，以免妨礙視覺。

　　15、BSL-3設(shè)施的設(shè)計和操作程序必須文件化。設(shè)施必須經(jīng)過測試以確證設(shè)計和操作參數(shù)在系統(tǒng)運轉(zhuǎn)前已達到要求。因操作經(jīng)驗，會修改操作程序，所以設(shè) 施必須反復(fù)測試，每年至少一次。

　　16、若有關(guān)病源陳述(根據(jù)風險分析、場所條件、其他有關(guān)法規(guī)而定)中要求，則應(yīng)采取其他環(huán)境保護措施(如，實驗人員淋浴、排出空氣的HEPA過濾、其他 管道設(shè)施的遏制處理、液體消毒劑的供應(yīng))。