PCR實(shí)驗(yàn)室建立的基本條件

　　PCR實(shí)驗(yàn)室建立的基本條件

　　臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室采用PCR技術(shù)用于臨床基因診斷，由于PCR技術(shù)對所檢測的核酸模板進(jìn)行大量擴(kuò)增，容易出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室污染導(dǎo)致臨床檢測標(biāo)本假陽性結(jié)果;另外由于PCR技術(shù)要求高、影響因素多(特別是RNA標(biāo)本)，實(shí)驗(yàn)過程處理不當(dāng)易導(dǎo)致核酸模板無擴(kuò)增現(xiàn)象，導(dǎo)致臨床標(biāo)本假陰性結(jié)果。因此臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收和規(guī)范化管理是PCR技術(shù)本身需要，也是在臨床上順利應(yīng)用該技術(shù)前提。

　　(一)硬件準(zhǔn)備--實(shí)驗(yàn)室基本建設(shè)

　　1、根據(jù)文件要求，臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室原則上分為四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域：試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū);標(biāo)本制備區(qū);擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū);擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，如使用全自動(dòng)封閉分析儀器檢測，此區(qū)域可不設(shè)。

　　2、各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用。

　　3、進(jìn)入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一流向進(jìn)行，即試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。

　　4、不同的工作區(qū)域使用不同的工作服(不同的顏色)。工作人員離開各工作區(qū)域時(shí)，不得將工作服帶出。

　　5、工作區(qū)域儀器設(shè)備配置標(biāo)準(zhǔn)：

　　(1)試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū) 2～8℃和-15℃冰箱：混勻器;微量加樣器(覆蓋1～1000μl);移動(dòng)紫外燈(近工作臺(tái)面);消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心);專用工作服和工作鞋;專用辦公用品等。

　　(2)標(biāo)本制備區(qū) 2～8℃冰箱，-20℃或-80℃冰箱;高速臺(tái)式冷凍離心機(jī);混勻器;水浴箱或加熱模塊;微量加樣器(覆蓋1～1000μl);可移動(dòng)紫外燈(近工作臺(tái)面);超凈工作臺(tái)，消耗品;一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心);專用工作服和工作鞋;專用辦公用品等。

　　(3)擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)核酸擴(kuò)增儀;微量加樣器(覆蓋1～1000μl);可移動(dòng)紫外燈(近工作臺(tái)面);消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心);專用工作服和工作鞋;專用辦公用品等。

　　(4)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)視檢測方法不同而定?；緝x器設(shè)備如下：微量加樣器(覆蓋1～200μl);可移動(dòng)紫外燈(近工作臺(tái)面);消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心);專用工作服和工作鞋;專用辦公用品等。

　　(二)軟件建設(shè)--質(zhì)量手冊編寫與實(shí)施、人才資源(上崗證培訓(xùn)與相關(guān)知識學(xué)習(xí))

　　臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量手冊編寫質(zhì)量手冊是闡明臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量方針，并描述過其質(zhì)量體系的文件。質(zhì)量手冊規(guī)定了質(zhì)量體系的基本結(jié)構(gòu)，是實(shí)施和保持質(zhì)量體系應(yīng)長期遵循的文件。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量手冊編寫應(yīng)依照衛(wèi)生部下發(fā)兩個(gè)文件，并結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況編寫適合本實(shí)驗(yàn)室的切實(shí)可行的質(zhì)量手冊。質(zhì)量手冊的提綱應(yīng)包括三部分：質(zhì)量方針和宗旨;工作制度;標(biāo)準(zhǔn)操作文件(SOP)。

　　(1)質(zhì)量方針和宗旨制定臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理目標(biāo)和質(zhì)量保證體系的結(jié)構(gòu)體系和總方針。

　　(2)工作制度一般應(yīng)包括以下文件：實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置、布局及組織結(jié)構(gòu);實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理制度;實(shí)驗(yàn)室的人員配置及管理制度;生物的防護(hù)與安全制度;實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理制度;實(shí)驗(yàn)室清潔消毒制度;儀器設(shè)備的管理制度;儀器、試劑、耗材購置程序及管理制度;臨床標(biāo)本的管理制度;實(shí)驗(yàn)室記錄的管理制度;質(zhì)量控制工作管理制度;結(jié)果報(bào)告管理制度;抱怨的內(nèi)部處理制度;負(fù)責(zé)人及質(zhì)檢員職責(zé);崗位設(shè)置和責(zé)任制等。

　　(3)標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)一般包括：消毒液配制標(biāo)準(zhǔn)操作程序：消毒標(biāo)準(zhǔn)操作程序;超凈工作臺(tái)使用標(biāo)準(zhǔn)操作程序;超凈工作臺(tái)維護(hù)和保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作文件;PCR儀使用標(biāo)準(zhǔn)操作程序;PCR儀維護(hù)和保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序;高速低溫離心機(jī)使用標(biāo)準(zhǔn)操作程序;移液器使用標(biāo)準(zhǔn)操作程序;冰箱維護(hù)和保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序;電熱恒溫水浴箱操作程序;電子天平使用和校正操作程序;可移動(dòng)紫外消毒車使用操作程序;加樣器校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序;離心機(jī)維護(hù)保養(yǎng)操作程序;溫度計(jì)校準(zhǔn)程序;試劑的質(zhì)檢操作程序;標(biāo)本唯一標(biāo)識編號編制規(guī)則;臨床標(biāo)本的采集及處理操作程序;臨床標(biāo)本的保存程序;乙肝病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序;丙肝病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序;結(jié)核分枝桿菌核酸擴(kuò)增熒光檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序;沙眼衣原體核酸擴(kuò)增熒光檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序等。

　　(4)引用圖表：PCR擴(kuò)增可接受標(biāo)本記錄表;PCR擴(kuò)增拒收標(biāo)本記錄表;室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果記錄表;室間質(zhì)控記錄表;消耗性材料驗(yàn)收記錄表;試劑驗(yàn)收記錄表;故障處理表;臺(tái)階式高速離心機(jī)使用記錄表;臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)使用記錄表;擴(kuò)增儀維護(hù)保養(yǎng)記錄表;人員培訓(xùn)計(jì)劃及培訓(xùn)記錄表;實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽表;主要設(shè)備一覽表;實(shí)驗(yàn)室清潔消毒記錄表;工作區(qū)溫度、濕度記錄表;抱怨記錄表;標(biāo)本超低溫保存記錄表;應(yīng)急處理記錄表;垃圾處理記錄表;冰箱溫度記錄表;水浴箱溫度記錄表;移動(dòng)紫外消毒車記錄表;設(shè)備校正記錄表;檢測結(jié)果報(bào)告流程;報(bào)告單樣張;臨床送檢標(biāo)本流程圖;實(shí)驗(yàn)室組織結(jié)構(gòu)圖。

　　文章來源：中國 

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